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細(xì)胞周期分析PI染色法
更新時(shí)間：2013-06-19
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細(xì)胞周期流式檢測（PI染色法）
1. 收集細(xì)胞：若懸浮生長細(xì)胞離心棄培養(yǎng)基，用PBS洗滌一次（建議用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA），若是貼壁生長細(xì)胞，加入合適體積的0.25%胰酶消化一分鐘左右（可顯微鏡觀察待細(xì)胞脫壁），吹起細(xì)胞后加入5ml 含10%血清的培養(yǎng)基，終止作用，轉(zhuǎn)移細(xì)胞至15ml離心管中，300g 離心5分鐘，用PBS洗滌細(xì)胞一次；
2. 用PBS洗滌細(xì)胞一次，300g離心5分鐘后棄上清；
3. 用500ul PBS 重懸細(xì)胞，振蕩混勻后加入5ml 70%冷乙醇溶液（放置在-20度預(yù)冷的70%乙醇溶液），混勻后放置4度過夜（可放置一周）；
4. 500g離心5分鐘后棄乙醇，用PBS懸浮細(xì)胞洗滌細(xì)胞一次；
5. 用PBS調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5 X 106個(gè)/ml,取500ul細(xì)胞懸液加入100ul 500ug/ml 的PI染色（用PBS配制500ug/ml的PI染色液），4°C避光放置30分鐘；
6. 加入100ul 煮沸過的RNase A （10mg/ml） 37度孵育30分鐘；
7. 混勻細(xì)胞后待上流式儀獲取分析。
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