Anti PEG 抗體（聚乙二醇抗體）常見問題解答

PEG 抗體

公司簡介：

Anti PEG由中國臺灣中央研究院生物醫(yī)學科學研究所創(chuàng)立。因此，公司的抗體有時被稱為"中研院"抗聚乙二醇抗體。中央研究院成立于1928年，至今仍是中國臺灣頂尖的研究機構(gòu)之一。

1999年，Anti PEG道了具有聚乙二醇特異性識別的單克隆抗體E11與AGP3（《生物共軛化學》10:520-528,1999）。其中AGP3抗體被成功應(yīng)用于聚乙二醇化干擾素α-2a（商品名派羅欣®）的加速開發(fā)（《生物共軛化學》12:195-202,2001；《專家意見-藥物遞送》6:1-16,2009）。

迄今公司已開發(fā)出系列抗PEG單克隆抗體，被全球280余所大學及國際制藥/生物技術(shù)公司用于聚乙二醇化藥物的分析與開發(fā)。

產(chǎn)品包括：

• 聚乙二醇化化合物與納米顆粒的定量檢測

• 靶向遞送PEG化納米載體的雙特異性抗體開發(fā)

• 人源抗PEG抗體制備

• 人體內(nèi)抗PEG抗體的檢測分析

產(chǎn)品描述：

聚乙二醇（PEG）是一種水溶性、無毒且生物相容性良好的聚合物。將PEG鏈與蛋白質(zhì)結(jié)合可降低其免疫原性、減少蛋白酶水解并延長血清半衰期。PEG修飾技術(shù)還廣泛應(yīng)用于小分子藥物和脂質(zhì)體的靶向遞送系統(tǒng)，通過對超順磁性氧化鐵顆粒和量子點的PEG化修飾，可顯著改善其生物相容性并降低非特異性攝取。

為實現(xiàn)PEG化化合物的高靈敏度檢測，Anti PEG研發(fā)出PEG特異性單克隆抗體AGP3。迄今已開發(fā)出系列抗PEG IgG/IgM單克隆抗體，適用于酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、流式細胞術(shù)（FACS）、免疫組化（IHC）及細胞分選等檢測平臺。

產(chǎn)品訂購：

Anti PEG 抗體常見問題解答（FAO）

1．什么是抗PEG抗體？

Anti PEG公司抗PEG抗體（AGP3、AGP4、E11、3.3和6.3） 是小鼠單克隆抗體，可特異性結(jié)合聚乙二醇（PEG）聚合物中的重復(fù)單元。這些抗體能夠識別任何末端結(jié)構(gòu)或連接方式的PEG（包括甲氧基PEG），適用于PEG化分子（如PEG化蛋白、顆粒及脂質(zhì)體）的檢測與分析。

此外，公司還提供一種靶向mPEG末端甲氧基的單克隆抗體（15-2b）。近期公司開發(fā)新開發(fā)了一種具有溫度選擇性的抗PEG單克隆抗體（2B5），其能夠可逆地結(jié)合PEG，且結(jié)合活性隨溫度變化而調(diào)節(jié)。

2．抗體的抗體亞型是什么？

AGP3與AGP4為IgM型抗體，需使用抗IgM二抗進行檢測；其余抗體（包括E11、3.3、6.3、2B5及15-1b）均屬IgG1亞型。

3.抗體的動物來源是什么？

抗體為小鼠來源，檢測時請使用對應(yīng)的抗小鼠二抗。

4.抗體中是否已加了防腐劑？

抗體中添加0.02%NaN3作為防腐劑。如需無防腐劑抗體，可接受特殊訂單定制（無需額外費用）。所有抗體產(chǎn)品均經(jīng)過濾除菌處理。

5.抗體是否家里載體蛋白。

無。

6. 抗體產(chǎn)品的儲存緩沖液成分是什么？

抗體以PBS緩沖液（含0.14 M NaCl、2.7 mM KCl、1.5 mM KH2PO4、8.1 mM Na2HPO4）形式運輸。對于生物素化抗體或非干冰運輸?shù)目贵w，我們將添加50%甘油作為保護劑。

7.抗體應(yīng)該如何保存？

抗體保存指南：

1）50%甘油保存的抗體：可長期保存于-20℃

2）干冰運輸?shù)目贵w：建議保存于-80℃

使用時，請分裝為工作用量后凍存于-80℃（或-20℃）。未污染微生物時，4℃可穩(wěn)定保存數(shù)月。可額外添加50%甘油，于-20℃保存至少1年

禁止以下操作：

1）儲存前稀釋抗體。 2）反復(fù)凍融抗體。

8.抗體可以保存多久？

未稀釋的抗體在-80℃條件下可穩(wěn)定保存至少3年；若添加50%甘油并于-20℃保存，則有效期至少為1年。

9. 這些抗體結(jié)合部位在哪里？

多數(shù)抗PEG抗體可結(jié)合聚乙二醇（PEG）聚合物中的重復(fù)單元，其最小結(jié)合域因抗體而異。例如：

3.3抗體：無法結(jié)合分子量＜750 Da的PEG分子

6.3抗體：可識別更小的抗原表位

AGP4抗體：結(jié)合表位最小（僅需4個環(huán)氧乙烷單元構(gòu)成的PEG4）

抗體按識別表位大小排序（從大到小）：

3.3 > AGP3 > E11 > 6.3 > AGP4

特別說明：

15-2b抗體不結(jié)合PEG主鏈，僅特異性識別mPEG末端的甲氧基。

10. 這些抗體能否結(jié)合游離（未偶聯(lián)）的PEG分子？

1）可檢測情況：

只要PEG分子處于"固定化"狀態(tài)，這些抗體即可與之結(jié)合。例如：

氨基末端PEG：可吸附于ELISA板，抗體對其顯示強結(jié)合力

其他固定化形式：

• 免疫組化切片中的PEG

• 硝酸纖維素膜上的PEG

最佳結(jié)合對象：與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)體、細胞及納米顆粒物理結(jié)合的PEG

2）不可檢測情況：

溶液中的游離PEG鏈僅被抗體低親和力結(jié)合，因此：ELISA檢測游離PEG靈敏度較低，未偶聯(lián)PEG不會干擾檢測實驗。

解決方案：

如需檢測游離PEG濃度，建議采用我們新開發(fā)的細胞檢測系統(tǒng)。

11.該抗體能否識別支鏈PEG及長鏈PEG？

1)支鏈PEG（branched chain PEG）：

可結(jié)合，但親和力取決于分支點結(jié)構(gòu)（需實驗驗證）

2)長鏈PEG（long PEG）：

• 分子量＞1,000 Da：強結(jié)合（依賴重復(fù)單元表位）

• 分子量＜750 Da：參見抗體特異性列表（如3.3抗體不結(jié)合）

12. 末端基團或連接臂是否會影響抗體的結(jié)合？

本公司的抗PEG抗體（AGP3、AGP4、E11、3.3、2B5及6.3）均靶向PEG骨架結(jié)構(gòu)，其結(jié)合活性不受偶聯(lián)技術(shù)或末端基團影響；而15-2b抗體則特異性識別部分PEG分子（mPEG）末端的甲氧基。

13.這些抗體能否用于血清樣本中PEG化化合物的檢測?

可以！經(jīng)實驗驗證，血清基質(zhì)不會顯著影響本公司抗PEG抗體與PEG化化合物的結(jié)合效能。

14. Tween-20是否會干擾抗體的結(jié)合活性？

1）6.3抗體：

嚴禁使用Tween-20（會顯著影響結(jié)合活性）

2）其他抗體（AGP3/E11/3.3/15-2b）：

可安全用于ELISA檢測（推薦濃度≤0.05%）

科學依據(jù)：所識別的表位大于Tween-20的PEG連接區(qū)

替代方案：

可使用CHAPS替代Tween-20

3）特殊案例（AGP4）：

雖識別小表位，但因IgM抗體的高親合力，Tween-20無顯著影響

15. ELISA檢測應(yīng)如何選擇抗體？

捕獲抗體：推薦使用 AGP4，包被濃度：0.25 μg/孔（96孔板）

檢測抗體（生物素標記）：可選：AGP3-biotin、3.3-biotin 或 AGP4-biotin，選擇：3.3-biotin（通常表現(xiàn)較好）

信號檢測系統(tǒng)：鏈霉親和素-HRP（推薦使用Jackson Laboratories的SA-HRP）

16. 抗PEG ELISA可檢測哪些類型的分子？

經(jīng)我們及同行驗證的可檢測分子包括（但不限于）：多種PEG修飾蛋白、PEG修飾脂質(zhì)體、PEG修飾納米點及PEG化納米顆粒。

17．抗體的檢測靈敏度是多少？

檢測限與待測物類型高度相關(guān)：

• PEG化量子點：~1 pM（夾心法檢測）

• 脂質(zhì)體藥物（如Lipodox®）：1 ng/mL

• PEG化蛋白（如Pegasys®）：1 ng/mL

18.有沒有標準的PEG抗體ELISA檢測流程？

是的，具體流程咨詢Anti –PEG中國區(qū)授權(quán)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。

19. 能否使用AGP3同時作為包被抗體和檢測抗體？

不可以。

原因如下：

背景干擾機制：

當加入二抗（抗IgM或抗Ig偶聯(lián)物）時，其會與包被在板上的AGP3結(jié)合，導(dǎo)致持續(xù)高背景信號

推薦方案：
? 檢測體系：

包被抗體：AGP3 或 AGP4

·       檢測抗體：AGP3-biotin/AGP4-biotin/3.3-biotin

·       信號系統(tǒng)：鏈霉親和素-HRP（SA-HRP）

※ 此組合適用于所有PEG化化合物的檢測

20．能否用低濃度抗體作為包被或檢測抗體？

是的，但當AGP3用作捕獲抗體時，檢測靈敏度會降低。然而，AGP4的量可以減少到0.25mg/孔，對測定靈敏度的影響很小。  

21. 可以預(yù)先混合生物素和鏈霉抗生物素蛋白檢測試劑嗎？

可以，強烈建議在將AGP3生物素或AGP4生物素加入ELISA板之前，將其與鏈霉抗生物素蛋白-HRP預(yù)混合。通常通過預(yù)混合來提高檢測靈敏度（見下文數(shù)據(jù)）。檢測時間也縮短了。

22.有沒有其他客戶使用過這些抗體？

是的，全球已有逾100家制藥與生物技術(shù)公司采購并使用本公司的抗PEG抗體。

23.如何訂購Anti-PEG 公司抗體？

請通過Anti-PEG授權(quán)中國區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司訂購。

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