大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導方案

大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導

背景簡介：

Goodpasture綜合征是一種由腎臟和肺部針對腎小球基底膜（GBM）的自身抗體引起的自身免疫性疾病，表現為嚴重的腎臟疾病和肺出血。患者自身抗體識別IV型膠原（NC1）α鏈（α1-α6）的非膠原結構域，該結構域包含GBM。更具體地說，主要的Goodpasture抗原在人類中被鑒定為IV型膠原α3鏈的NC1結構域[α3（IV）NC1]，并在幾種動物模型中得到證實。此外，Kohda等人報告稱，通過用重組α4（IV）NC1片段免疫Wistar Kyoto（WKY）大鼠或免疫抗α4（IV）NC1抗體，可以在WKY大鼠中誘導這種疾病模型。

為了誘導大鼠實驗性自身免疫性腎小球腎炎，Chondrex提供了兩種免疫方案，分別為抗IV型膠原NC1片段抗體和IV型膠原NC1片段誘導的腎炎。大鼠抗α4（IV）NC1單克隆抗體可以通過單次腹腔（IP）或靜脈（IV）注射誘導腎炎。Chondrex，股份有限公司還提供小鼠和大鼠腎NC1片段作為ELISA抗原，以量化自身抗體對免疫牛NC1片段的交叉反應性。

操作流程：

IV型膠原NC1片段誘導的大鼠腎小球腎炎

1）動物選擇：7-8周齡WKY品系大鼠。對模型的敏感性與WKY大鼠亞系，供應商和實驗設施有關。

2）免疫原：用1ml 0.05mol/L的PBS （Ph7.4）溶解IV型膠原NC1片段（cat#1102,1mg）

3）乳劑制備：用IV型膠原NC1片段與弗氏佐劑（CFA, 1mg/ml,cat#7008）等體積混合制備乳劑。

注意：乳劑混完后，滴一滴到水中檢測乳劑質量，如果散開表明質量不好，需要重新制備

4）免疫：大鼠尾根部皮下注射200ul制備好的乳劑。

注意：第七天加強免疫對一些低敏感品系，誘發(fā)腎炎模型是有效的。如果加強免疫應該用IFA佐劑和IV型膠原NC1片段配成的乳劑去誘導，而不是CFA佐劑，尾根部皮下免疫200ul。研究者應優(yōu)化實驗條件，比如免疫時間，劑量和供應商等。

5）模型評估：

免疫后，建議觀察大鼠至35天。每周進行16小時蛋白尿評估，以確認腎炎模型的嚴重程度。推薦使用Chondrex 大鼠尿蛋白檢測試劑盒（cat#9040）,進行蛋白尿測定。易感WKY大鼠的蛋白尿在14-21天可以檢測到，在21-28天達到高峰。

WKY 大鼠（雌性，7周）免疫IV型膠原NC1片段和CFA配成的乳劑后，尿蛋白水平變化，從第10天檢測到蛋白尿，持續(xù)到第28天。

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